厌氧培养箱的使用

厌氧培养箱亦称厌氧工作站或厌氧手套箱。厌氧培养箱是一种在无氧环境条件下进行细菌培养及操作的专用装置。它能提供严格的厌氧状态恒定的温度培养条件和具有一个系统化、科学化的工作区域。

　厌氧培养箱使用（一）操作室厌氧环境形成：

1、按使用要求放置好必要的附件和器具；

2、通电源开照明灯，开温控仪，调节所需温度；

3、操作室内放入1000g钯粒（封闭）和500g干燥剂，并放入美兰指示纸（封闭）；

4、关紧取样室内外门，并抽真空校验；

5、操作室内次置换（氮气置换）：

A、把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧

B、接通氮气进气路，打开氮气控制阀1，使手套鼓起，关闭阀门1，然后扎紧袋口；

6、厌氧培养箱操作室第二次置换（氮气置换）重复一次充氮过程，取样室先抽真空，并注意随时用脚踏开关开闭排气。如此连续三次氮气置换。

7、操作室第四次置换（混合气体置换）：

（混合气体配比为N285%、H210%、CO25%）

A、调换气路打开混合气阀3进气，充气时取样室先抽真空，并随时用脚踏开关开闭排气；

B、关掉混合气体阀3，并打开阀5，使混合气体经过流量计，调整流量计，流量为每分钟10ml左右；

C、混合气体重复2-3次转换，经过上述过程，基本形成厌氧环境。

8、操作室内打开粑粒除氧剂，接通除氧催化器电源进行催化除氧，一小时后打开美兰指示纸观察其变色状况，不变色为操作室内达到厌氧环境；

9、开紫外线灭菌灯，室内进行灭菌处理，灭菌时间按具体实验自定。

（二）菌种的置入和培养：

1、检查取样室内门并关紧；

2、打开取样室外门，将菌种放入取样室后即关上外门；

3、取样室充氮置换三次过程：打开真空泵，先抽真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后人工打开氮气阀2进气，使指针回复零位，关掉阀2。第二次重复操作一次。第三次操作时，使真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后打开阀4进混合气，使指针回复零位，关掉阀

4。取样室充氮置换三次过程结束；

4、如选定真空度较低就需要增加置换的次数；

5、取样室外门开启、关紧，再抽低真空度100ml汞柱（13kPa）检验；

6、厌氧培养箱需要长期连续使用的条件：

A、每天在操作室内打开美兰指示纸观察，如不正常就必须重新换气；

B、要长期连续输入微量的混合气体，使补进的氮气能和微量的氧结合通过催化吸收，保证室内厌氧状态，补入混合气流量选定为每分钟10ml左右；

C、连续培养运行一天，更换一次除氧剂和干燥剂。

D、操作室内温度可任意选择和控制。

7、混合气瓶、氮气瓶输出压力调整：调节减压阀，使输出压力0、1Mpa左右。