如何进行液相色谱的清洗和钝化

如何进行液相色谱的清洗和钝化下面为大家整理了相关的解答，供参考。

本文将做详细介绍。

一、清洗

清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢，清洗必须在钝化之前完成。通常使用30%磷酸水溶液清洗，具体操作如下:

1取下色谱柱，改用两通连接。

2用超纯水灌注泵头。

3用30%磷酸水溶波以1mL/min的流速冲洗1h(UPLC降低流速增加冲洗时间)。

4换成超纯水冲洗至出水口水pH显中性。

5用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用。

二、钝化

钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜。钝化为了解决物质的拖尾问题。这些物质是极性明离子的分析物，如含磷酸官能团的分析物，有机酸分析物，糖苷类物质和生物大分子(包含多肽，蛋白、核苷等)。以下是钝化的目的和具体操作：

1钝化的目的

-防止腐蚀:钝化层可以阻止金属与腐蚀介质接触，减少金属腐蚀速度。

-增加耐久性:钝化层可以提高金属的耐久性和抗磨损性能，延长其使用寿命。

-改善峰形:金属离子和待测物形成相互作用，会造成色谱峰消失或峰展宽。特别是对含有磷酸基团或羧酸基团的物质具有明显的峰形改善。

2钝化具体操作

-取下色谱柱，改用两通连接，用纯水灌注泵头。

-用6M硝酸水溶液以1mL/min的流速钝化1h(UPLC降低流速增加钝化时长)。

-换成清水洗至出口水pH显中性。

-用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用。

3如果钝化解决不了，那就解决残存的金属离子。解决思路有两个，一个是竞争金属离子，一个是消灭金属离子

-竞争金属离子:在流动相中加入EDTA或柠檬酸或亚甲基二磷酸，也可使用基质样品饱和管路，使用高浓度待测物饱和管路，酸化样品等都是可供尝试的策略，注意在质谱系统中EDTA可能造成离子抑制，造成分析物的信号降低，亦可能在喷针尖端析出。

-消灭金属离子：替换掉金属管路，比如使用生物惰性仪器组件和色谱柱硬件(如月旭金刚石柱管色谱柱)等。

总结：以上是液相色谱的清洗和钝化方法，希望对您有所帮助。